2008年3月5日 星期三

[活動]透明魚

[上學期在生物研習社跟大家一起學做透明骨骼標本。

很有趣的是不需要拼圖就可以觀察脊椎動物體內的骨骼排列,

想當初我親愛的Partner阿信費盡千辛萬苦還弄丟小骨頭才把蛙骨拼圖完成,

現在利用化學藥劑的處理就可以省下一些找骨頭的腦力了 :P

不過很花時間、也很花藥品~最複雜的應該就是藥品的配置了,

還有,耐心的等待....]



目的:

透明骨骼標本的製作是利用化學藥品、酵素及染劑,

對動物體的肌肉進行固定、退色透明,並將骨骼染色的過程。

由於小型脊椎動物或是幼體,骨骼較脆弱或是尚未發育完全,

所以製作透明骨骼標本是希望在不破壞動物整體的構造下,

仍然可清楚看見動物體內軟骨和硬骨的分布。



器材:

底片盒(添加溶液的體積皆以底片盒為準)、血清瓶(250 ml)、

量筒(10 ml、50 ml)、塑膠滴管、刀片、解剖工具。



材料:

10%甲醛溶液(脂化凝固)

蒸餾水(洗滌)

藍染劑(10mg alcian blue(艾爾遜藍)+80ml 95%alcohol+20ml 冰醋酸)(將軟骨染色)

95%alcohol(脫水脫脂)

90% alcohol(脫水脫脂)

40% alcohol(脫水脫脂)

15% alcohol(脫水脫脂)

酵素溶液(30ml飽和硼酸鈉溶液+70ml蒸餾水+1g trypsin(胰蛋白酶))(分解蛋白質)

(於冷藏庫保存;使用時置於室溫下。)

0.5%之KOH(使蛋白質膨脹透明)

紅染劑(alizarin red(茜素紅S):冰醋酸:蒸餾水=1:2:12)(將硬骨染色)

0.5%KOH-甘油(3:1)(使蛋白質透明)

0.5%KOH-甘油(1:1)(使蛋白質透明)

0.5%KOH-甘油(1:3)(使蛋白質透明)

3%雙氧水(H2O2)(漂白)

甘油(透明及保存)

麝香草酚(Thymol)(防腐、防黴菌生長)



步驟:

1.將魚標本置於5-10%之甲醛溶液2-3天或更久(亦可直接進入第二步驟)。

2.用蒸餾水滴洗2-3天後,清理表面組織及內臟組織(切口愈小愈好)。

3.直接放置於藍染劑 24-48小時。

4.用95%alcohol浸泡2-3小時兩次。

5.依次用90% alcohol 處理2-3小時、40% alcohol 處理2-3小時、

15% alcohol處理2-3小時,直至標本沉下。

6.置於蒸餾水2-3小時直到標本下沉。

7.放置於酵素溶液中,但每隔2-3天溶液呈淺藍色時,

更換溶液,直至骨骼可清楚看見,同時表層肌肉無藍色存在。

8.將溶液換成0.5%之KOH溶液1-2天。

9.更換新的KOH溶液,並加數滴紅染劑,依標本大小而染色時間不同,

直至骨骼完全染紅為止。

10.依次轉換0.5%KOH-甘油溶液(3:1)、0.5%KOH-甘油溶液(1:1)、

0.5%KOH-甘油溶液(1:3)、直到純甘油。

(在最初之KOH-甘油溶液中每100ml可加3-4滴3%之雙氧水。)

11.將標本置於純甘油下保存,必要時加thymol來防霉防菌。



問題與討論:

1.請以自己做出的透明骨骼標本,判定軟骨與硬骨的所在位置。

2.實驗過程中是否有遭遇什麼問題?後來如何解決問題?



參考資料:

http://blog.yam.com/ctbioclub/article/5985647

http://www.sulps.ptc.edu.tw/new_page_5_4.htm

http://140.117.11.2/txtVersion/treasure/biology/M.855729376.D/M.847823054.A.html

http://fishdb.sinica.edu.tw/~fhfresh/6guard/6a4e_.htm



[晚些再把成品放上:D]

14 則留言:

  1. 你好呀~ 我e+ 都整緊透明魚

    但係次次都浸到 d 肉無晒, 爛晒

    點解你條魚都係咁細

    但d 肉又無爛既?

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  2. 老師您好:

    請問您用的藍、紅染劑 在那買到的???

    小弟找了很多家化工材料行都找不到



    感謝

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  3. 不好意思,我想請問一下!

    如果不用酵素,有沒有其他的方法可以製作骨骼

    標本!!

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  4. 瑞祥高中生研社2011年6月20日 清晨5:55

    小來老師您好:

      我是瑞祥高中生研社社員葉文琪,前幾天在您

    的網誌上看到一個關於透明魚的製作,也想在社團

    課時做做看,所以在網路上找了一些資料,但似乎

    需要很多天才能做好,而社團課又只有兩節課。知

    道您有在社團課做過,所以想請教老師之前教導學

    生的經驗,及當時花了幾節課,還有事前是否需先

    處理,如需要則要花多久的時間。

    這是我的e-mail

    vickyyeh22@gmail.com

    謝謝老師的教導,如有不禮貌的地方,請老師多包

    含。

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  5. 謝謝老師給的建議

    開學後會再跟社團老師討論

    真的很感謝您

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  6. 瑞祥高中生研社2011年12月6日 凌晨3:26

    老師不好意思我想請問一下

    需要用到的溶液及染劑要去哪裡買呢??

    thanks

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  7. 瑞祥高中生研社2011年12月11日 晚上10:24

    小來老師您好

    想請問您,藍染劑與紅染劑有沒有可以替代的染

    劑呢?

    謝謝您:)

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  8. 你好我是嘉藥生科系的同學

    謝謝你提供染色資料

    因為我找到的資料是雙染(藍+紅)

    但是我現在想是單染紅色

    請問老師有建議的方法嗎

    我們實驗室使用的魚是14天大的斑馬魚

    我是想看看7-20天的硬骨變化



    希望老師能給予建議

    email...nmmommn@gmail.com

    麻煩您了

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  9. 小來老師您好,不好意思

    請問您上面文章說要的化學藥劑的量,是可以很

    多隻同時放在一起浸泡嗎?還是那是一條魚的標

    本要用的量?

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  10. 老師您好







    我想請問 胰蛋白酶可以在哪裡取得







    另外前面說可以用氫氧化鈉取代.氫氧化鈉也可以

    使肉變透明.還是只是單純把肉分解掉







    謝謝指教

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  11. 老師

    請問在造透明魚的第二個步驟: 用蒸餾水滴洗兩

    天是什麼意思呢? 水要不停滴在魚上嗎?



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  12. 作者已經移除這則留言。

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  13. 哈囉老師您好
    想請教一下台灣哪裡可以購買到
    軟骨染色液: alcian blue(艾爾遜藍)
    酵素溶液:Trypsin
    硬骨染色液 :alizarin red(茜素紅S)
    (急)������
    謝謝您

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    1. 第二個是
      胰蛋白酵素溶液:Trypsin
      謝謝您

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