[上學期在生物研習社跟大家一起學做透明骨骼標本。
很有趣的是不需要拼圖就可以觀察脊椎動物體內的骨骼排列,
想當初我親愛的Partner阿信費盡千辛萬苦還弄丟小骨頭才把蛙骨拼圖完成,
現在利用化學藥劑的處理就可以省下一些找骨頭的腦力了 :P
不過很花時間、也很花藥品~最複雜的應該就是藥品的配置了,
還有,耐心的等待....]
目的:
透明骨骼標本的製作是利用化學藥品、酵素及染劑,
對動物體的肌肉進行固定、退色透明,並將骨骼染色的過程。
由於小型脊椎動物或是幼體,骨骼較脆弱或是尚未發育完全,
所以製作透明骨骼標本是希望在不破壞動物整體的構造下,
仍然可清楚看見動物體內軟骨和硬骨的分布。
器材:
底片盒(添加溶液的體積皆以底片盒為準)、血清瓶(250 ml)、
量筒(10 ml、50 ml)、塑膠滴管、刀片、解剖工具。
材料:
10%甲醛溶液(脂化凝固)
蒸餾水(洗滌)
藍染劑(10mg alcian blue(艾爾遜藍)+80ml 95%alcohol+20ml 冰醋酸)(將軟骨染色)
95%alcohol(脫水脫脂)
90% alcohol(脫水脫脂)
40% alcohol(脫水脫脂)
15% alcohol(脫水脫脂)
酵素溶液(30ml飽和硼酸鈉溶液+70ml蒸餾水+1g trypsin(胰蛋白酶))(分解蛋白質)
(於冷藏庫保存;使用時置於室溫下。)
0.5%之KOH(使蛋白質膨脹透明)
紅染劑(alizarin red(茜素紅S):冰醋酸:蒸餾水=1:2:12)(將硬骨染色)
0.5%KOH-甘油(3:1)(使蛋白質透明)
0.5%KOH-甘油(1:1)(使蛋白質透明)
0.5%KOH-甘油(1:3)(使蛋白質透明)
3%雙氧水(H2O2)(漂白)
甘油(透明及保存)
麝香草酚(Thymol)(防腐、防黴菌生長)
步驟:
1.將魚標本置於5-10%之甲醛溶液2-3天或更久(亦可直接進入第二步驟)。
2.用蒸餾水滴洗2-3天後,清理表面組織及內臟組織(切口愈小愈好)。
3.直接放置於藍染劑 24-48小時。
4.用95%alcohol浸泡2-3小時兩次。
5.依次用90% alcohol 處理2-3小時、40% alcohol 處理2-3小時、
15% alcohol處理2-3小時,直至標本沉下。
6.置於蒸餾水2-3小時直到標本下沉。
7.放置於酵素溶液中,但每隔2-3天溶液呈淺藍色時,
更換溶液,直至骨骼可清楚看見,同時表層肌肉無藍色存在。
8.將溶液換成0.5%之KOH溶液1-2天。
9.更換新的KOH溶液,並加數滴紅染劑,依標本大小而染色時間不同,
直至骨骼完全染紅為止。
10.依次轉換0.5%KOH-甘油溶液(3:1)、0.5%KOH-甘油溶液(1:1)、
0.5%KOH-甘油溶液(1:3)、直到純甘油。
(在最初之KOH-甘油溶液中每100ml可加3-4滴3%之雙氧水。)
11.將標本置於純甘油下保存,必要時加thymol來防霉防菌。
問題與討論:
1.請以自己做出的透明骨骼標本,判定軟骨與硬骨的所在位置。
2.實驗過程中是否有遭遇什麼問題?後來如何解決問題?
參考資料:
http://blog.yam.com/ctbioclub/article/5985647
http://www.sulps.ptc.edu.tw/new_page_5_4.htm
http://140.117.11.2/txtVersion/treasure/biology/M.855729376.D/M.847823054.A.html
http://fishdb.sinica.edu.tw/~fhfresh/6guard/6a4e_.htm
[晚些再把成品放上:D]
你好呀~ 我e+ 都整緊透明魚
回覆刪除但係次次都浸到 d 肉無晒, 爛晒
點解你條魚都係咁細
但d 肉又無爛既?
老師您好:
回覆刪除請問您用的藍、紅染劑 在那買到的???
小弟找了很多家化工材料行都找不到
感謝
不好意思,我想請問一下!
回覆刪除如果不用酵素,有沒有其他的方法可以製作骨骼
標本!!
小來老師您好:
回覆刪除我是瑞祥高中生研社社員葉文琪,前幾天在您
的網誌上看到一個關於透明魚的製作,也想在社團
課時做做看,所以在網路上找了一些資料,但似乎
需要很多天才能做好,而社團課又只有兩節課。知
道您有在社團課做過,所以想請教老師之前教導學
生的經驗,及當時花了幾節課,還有事前是否需先
處理,如需要則要花多久的時間。
這是我的e-mail
vickyyeh22@gmail.com
謝謝老師的教導,如有不禮貌的地方,請老師多包
含。
謝謝老師給的建議
回覆刪除開學後會再跟社團老師討論
真的很感謝您
老師不好意思我想請問一下
回覆刪除需要用到的溶液及染劑要去哪裡買呢??
thanks
小來老師您好
回覆刪除想請問您,藍染劑與紅染劑有沒有可以替代的染
劑呢?
謝謝您:)
你好我是嘉藥生科系的同學
回覆刪除謝謝你提供染色資料
因為我找到的資料是雙染(藍+紅)
但是我現在想是單染紅色
請問老師有建議的方法嗎
我們實驗室使用的魚是14天大的斑馬魚
我是想看看7-20天的硬骨變化
希望老師能給予建議
email...nmmommn@gmail.com
麻煩您了
小來老師您好,不好意思
回覆刪除請問您上面文章說要的化學藥劑的量,是可以很
多隻同時放在一起浸泡嗎?還是那是一條魚的標
本要用的量?
老師您好
回覆刪除我想請問 胰蛋白酶可以在哪裡取得
另外前面說可以用氫氧化鈉取代.氫氧化鈉也可以
使肉變透明.還是只是單純把肉分解掉
謝謝指教
老師
回覆刪除請問在造透明魚的第二個步驟: 用蒸餾水滴洗兩
天是什麼意思呢? 水要不停滴在魚上嗎?
謝
作者已經移除這則留言。
回覆刪除哈囉老師您好
回覆刪除想請教一下台灣哪裡可以購買到
軟骨染色液: alcian blue(艾爾遜藍)
酵素溶液:Trypsin
硬骨染色液 :alizarin red(茜素紅S)
(急)������
謝謝您
第二個是
刪除胰蛋白酵素溶液:Trypsin
謝謝您